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本试剂盒适用于从血浆、血清、羊水等无细胞体液中纯化回收游离DNA（Free circulating/Cell-free DNA）。高盐时，游离DNA结合于硅基包被的磁珠表面。漂洗后，游离DNA洗脱于Buffer EB或去离子水中。游离DNA的得率与样品类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可用于定量PCR、产前诊断等下游实验。

本试剂盒可与磁棒法磁珠自动纯化系统、液体工作站配套使用，简单、快速地进行高通量提取，大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。

• KingFisher Flex
  
• 恒温混匀仪
  
• 无水乙醇

• 向每支Proteinase K粉末中加入指1.25mL的Proteinase K保存液使其溶解，之后-20℃保存。配置好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
  
• 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取得率低。
  
• 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
  
• Magbeads ZN严禁冰冻和高速离心，否则可能会对Magbeads ZN造成不可逆的损害。
  
• Magbeads ZN在使用前需涡旋振荡20秒使其充分混匀。

• 手动操作步骤
  
  • 向1.5mL离心管中加入20μL Proteinase K、300μL血浆、360μL Buffer MPL和20μL Magbeads ZN。
    
  • 将离心管放于56℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡裂解10分钟，或涡旋震荡混匀后56℃水浴10分钟，期间涡旋混匀3次。
    
  • 将离心管从恒温混匀仪上取下，之后放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡裂解10分钟或连续颠倒混匀10分钟。
    
  • 将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后弃去溶液。
    
  • 向离心管中加入600μL Buffer CW1，之后将离心管放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟或涡旋震荡1分钟。
    
  • 将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后弃去溶液。
    
  • 重复步骤5-6。
    
  • 将离心管从磁力架上取下短暂离心，之后将离心管重新放于磁力架上，用移液器进一步去除管底溶液。
    
  • 向离心管中加入600μL Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无水乙醇），之后将离心管放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟或涡旋震荡1分钟。
    
  • 将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后弃去溶液。
    
  • 重复步骤9-10。
    
  • 将离心管从磁力架上取下短暂离心，之后将离心管重新放于磁力架上，用移液器进一步去除管底溶液。
    
  • 保持离心管固定于磁力架上静置5～10分钟，使乙醇充分挥发。
    
  • 向离心管中加入50μL Buffer EB，涡旋震荡混匀后将离心管放于56℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡10分钟或放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间涡旋混匀3次。
    
  • 将离心管放于磁力架上静置2分钟，之后将洗脱液转移至新的离心管中低温保存。
• 与KingFisher Flex匹配
  
  • 按下表将样品与试剂加入相应位置：
    

    名称	类型	试剂及用量
    Sample Plate	DW 96深孔板	Proteinase K:20μL Plasma:300μL Buffer MPL:360μL
    Wash Plate I	DW 96深孔板	Buffer CW1:750μL
    Wash Plate II	DW 96深孔板	Buffer CW1:750μL
    Wash Plate III	DW 96深孔板	Buffer GW2:750μL Magbeads:20μL 96 DW Comb
    Wash Plate IV	DW 96深孔板	Buffer GW2:750μL
    Elution Plate	DW 96深孔板	Buffer EB:60μL

    
    
  • 打开KingFisher Flex仪器，运行CW2522_Flex程序，按照仪器提示将深孔板与磁套放入仪器中。
    
  • 约50分钟后程序运行结束，取出深孔板。将洗脱板用封口膜封闭后冷冻保存。